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幫助中心-北京博奧森生物技術有限公司




    

       


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免疫組化問題解答

       

    








    1、染色過強？
    


    

      

    • 原 因
      • 

    • 解決方法
      • 

    • 抗體濃度過高或孵育時間過長
      • 

    • 降低抗體滴度、抗體孵育時間：室溫1小時或4度過夜
      • 

    • 孵育溫度過高超過37度
      • 

    • 一般在室溫20-28度
      • 

    • DAB顯色時間過長或濃度過高
      • 

    • 顯色時間不超過5-12分鐘，以顯微鏡下觀察為準
      • 

    

    

    2、非特異性背景染色？
    


    

      

    • 原 因
      • 

    • 解決方法
      • 

    • 操作過程中沖洗不充分
      • 

    • 每步沖洗3次每次5分鐘
      • 

    • 組織中含過氧化物酶未阻斷
      • 

    • 可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時間延長
      • 

    • 組織中含內原性生物素
      • 

    • 正常非免疫動物血清再封閉
      • 

    • 血清蛋白封閉不充分
      • 

    • 血清蛋白封閉不充分
      • 

    

    

    3、染色弱？
    


    

      

    • 原 因
      • 

    • 解決方法
      • 

    • 抗體濃度過低、孵育時間過短
      • 

    • 提高抗體濃度、孵育時間不能少于60分鐘
      • 

    • 試劑超過有效使用時間
      • 

    • 應更換試劑
      • 

    • 操作中添加試劑時緩沖液未瀝干
      • 

    • 每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液
      使試劑稀釋 （應防止切片干燥）
      • 

    • 室溫太低，低于15度
      • 

    • 要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4度冰箱過夜
      • 

    • 蛋白封閉過度
      • 

    • 封閉不要超過12分鐘
      • 

    

    

    4、染色陰性？
    


    

      

    • 原 因
      • 

    • 解決方法
      • 

    • 操作步驟錯誤
      • 

    • 應重試，設陽性對照
      • 

    • 組織中無抗原
      • 

    • 設陽性對照以驗證試驗結果
      • 

    • 一抗與二抗種屬連接錯誤
      • 

    • 仔細確定一抗二抗種屬無誤
      • 

    

    







       

       


       

    


    








    


    

    


    

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